Listeria spp. em queijos Minas Frescal e avaliação das condições higiênicossanitárias de produção e comercialização em Viçosa, MG, Brasil / Listeria spp. in Minas Frescal cheeses and assessement of hygienic-sanitary conditions of production and commercialization in Viçosa, MG, Brazil

A produção de queijo Minas Frescal em propriedades rurais é uma atividade econômica importante em Minas Gerais. Entretanto, a presença de micro-organismos patogênicos compromete a segurança desses produtos, coloca a saúde pública em risco e ameaça esta atividade. Neste estudo, objetivou-se avaliar a ocorrência de Listeria spp. em queijos Minas Frescal, as condições de produção e comercialização desses produtos e relacioná-las à presença desses micro-organismos. Foram coletadas 161 amostras, 81 em agroindústrias e 80 em seus pontos de venda. Foram utilizados métodos analíticos oficiais estabelecidos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento para detecção e diferenciação das espécies de Listeria. A adoção das boas práticas durante a fabricação e a comercialização foi mensurada mediante avaliação in loco direcionada por listas de verificação pré-elaboradas. Constatou-se Listeria spp. em 14 amostras (8,7%) provenientes de oito das doze agroindústrias estudadas, quatro inspecionadas e quatro não inspecionadas. L. monocytogenes foi isolada em duas amostras. O percentual de atendimento às boas práticas de fabricação variou entre 28,3% e 51,1% e diversas irregularidades foram observadas durante a comercialização dos queijos. Os resultados indicam risco potencial do consumo deste tipo de produto e a necessidade de adoção das boas práticas de fabricação e comercialização para prevenir contaminações.

The production of Minas Frescal cheese on rural properties is an important economic activity in Minas Gerais, Brazil. However, the presence of pathogenic microorganisms compromises the safety of these products, puts public health at risk and threatens this activity. The purpose of this paper was to evaluate the conditions of production and commercialization of the Minas Frescal cheese produced in family agroindustries of Viçosa, MG and to connect them to presence of Listeria spp. A total of 161 samples of Minas Frescal cheese were collected, 81 which were in agroindustries and 80 in their respective market. Were adopted official analytical methods established by the Agriculture Ministry for the detection and differentiation of Listeria spp. The conditions of manufacture and commercialization were evaluated through observations directed by pre-elaborated checklists. Listeria spp. was detected in 14 samples (8.7%) from eight different establishment, four inspected and four non-inspected. L. monocytogenes was isolated in two samples. The compliance with good manufacturing practices ranged from 28.3% to 51.1% and several irregularities were observed during the marketing of the cheeses. These results indicate the potential risk of consumption of this product and the need to prevent contamination of this product in manufacturing and marketing stages.

Detecção de Listeria spp de importância em saúde pública em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of Listeria spp important in public health from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Queijos tipo Minas frescal podem veicular microrganismos patogênicos. Este estudo objetivou isolar Listeria spp. e identificar as espécies L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii e L. monocytogenes na obtenção do leite e na elaboração de queijos tipo Minas frescal e detectar a presença de genes de virulência. Foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo em Jaboticabal-São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, amostras de mãos de ordenhador, balde de ordenha, leite, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. O gênero Listeria spp. teve alta prevalência nas amostras, entretanto, nenhuma das espécies pesquisadas foi identificada. Assim, conclui-se que a presença de Listeria spp. em alta percentagem representa potencial risco de contaminação de Queijos tipo Minas frescal e exige uma vigilância contínua para a presença deste gênero.

Resultados das conformidades e não conformidades dos parâmetros microbiológicos de queijo Minas Artesanal Canastra / Conformity and non-conformity results of the microbiological parameters of Minas Artesanal Canastra cheese

O objetivo do trabalho foi analisar a qualidade microbiológica do Queijo Minas Artesanal produzido por queijarias certificadas da microrregião Canastra durante os anos de 2016 e 2017, utilizando os resultados das análises microbiológicas do queijo nestes anos. Foram encontradas não conformidades nos queijos estudados em 7,84% das amostras para Coliformes totais, 3,92% para coliformes termotolerantes e 9,8% para Staphylococcus coagulase positivo, porém nenhuma análise apresentou presença de Listeria spp. ou Salmonella spp. Apesar das principais bactérias patogênicas não terem sido encontradas, as não conformidades indicam a necessidade da orientação do produtor sobre as Boas Práticas de Fabricação e de Ordenha. Além disto, é imprescindível a orientação sobre as exigências do órgão fiscalizador e a realização da análise do queijo periodicamente, tornando possível o acompanhamento da qualidade do queijo produzido na região e a correção das não conformidades encontradas.

Pesquisa de microrganismos patogênicos em produtos cárneos de estabelecimentos certificados pelo Serviço de Inspeção Municipal de Rio Verde – GO / Research of pathogenic microrganisms in meat products from certified establishments by the Rio Verde Municipal Inspection Service - GO

A incidência e a quantidade dos microrganismos patogênicos, presentes na carne, varia de acordo com as condições de manejo durante a criação e com os cuidados higiênicos nas operações de abate dos animais e posterior manipulação das carcaças. Neste sentido, este trabalho promoveu uma análise microbiológica de microrganismos patogênicos presentes em quibe cru e cortes de frango temperado produzidos no município de Rio Verde, Goiás. No diagnóstico, foram encontradas prevalências de Salmonella spp., Bacillus cereus e Listeria spp, comprovando as falhas presentes na manipulação. Concluindo que há falhas e necessidades de adequações técnicas, como adequação na legislação vigente à realidade dos municípios.

Ocorrência de Listeria spp. e aspectos microbiológicos em queijos coalho comercializados em retalho no comércio varejista de Arapiraca–AL / Occurrence of Listeria spp. and microbiological aspects in coalho cheeses commercialized in the retail trade of Arapiraca–AL

Objetivou-se determinar a frequência de L. monocytogenes (LM) e aspectos microbiológicos em queijos coalho comercializados sob fracionamento em estabelecimentos varejistas no município de Arapiraca - AL. Foram realizadas análises de Listeria spp. e pesquisa de LM em caso de positividade conforme a ISO 11290-1, coliformes a 45°C, mesófilos e psicrotróficos em 25 amostras de queijo coalho. Dentre as 25 amostras colhidas, 7/25 (28%) apresentaram resultado positivo para a contaminação por Listeria spp. Dessas, 2/7 (28,5%) tiveram positividade confirmada através dos testes bioquímicos para LM. Além disso, a qualidade higiênico-sanitária dos produtos nesse estudo, demonstram a necessidade de uma maior atenção dos órgãos ligados à saúde pública visando combater a LM, possibilitar melhores condições de higiene e evitar contaminação cruzada.

Performance of two alternative methods for Listeria detection throughout Serro Minas cheese ripening

ABSTRACT The ability of pathogens to survive cheese ripening is a food-security concern. Therefore, this study aimed to evaluate the performance of two alternative methods of analysis of Listeria during the ripening of artisanal Minas cheese. These methods were tested and compared with the conventional method: Lateral Flow System™, in cheeses produced on laboratory scale using raw milk collected from different farms and inoculated with Listeria innocua; and VIDAS®-LMO, in cheese samples collected from different manufacturers in Serro, Minas Gerais, Brazil. These samples were also characterized in terms of lactic acid bacteria, coliforms and physical-chemical analysis. In the inoculated samples, L. innocua was detected by Lateral Flow System™ method with 33% false-negative and 68% accuracy results. L. innocua was only detected in the inoculated samples by the conventional method at 60-days of cheese ripening. L. monocytogenes was not detected by the conventional and the VIDAS®-LMO methods in cheese samples collected from different manufacturers, which impairs evaluating the performance of this alternative method. We concluded that the conventional method provided a better recovery of L. innocua throughout cheese ripening, being able to detect L. innocua at 60-day, aging period which is required by the current legislation.

Enzyme-linked imunoassays for the detection of Listeria sp. and Salmonella sp. in sausage: a comparison with conventional methods

This study was carried out comparing the conventional methods (ISO 11290-1 and BAM method, 2008) and system mini-Vidas® (Biomerieux), for detection of Listeria sp. and Salmonella sp. in cooled sausage. The immunoenzymatic method has shown to be effective for the detection of target pathogens, it has presented itself as an excellent screening method.

Biological activities of a mixture of biosurfactant from Bacillus subtilis and alkaline lipase from Fusarium oxysporum

In this study, we investigate the antimicrobial effects of a mixture of a biosurfactant from Bacillus subtilis and an alkaline lipase from Fusarium oxysporum (AL/BS mix) on several types of microorganisms, as well as their abilities to remove Listeria innocua ATCC 33093 biofilm from stainless steel coupons. The AL/BS mix had a surface tension of around 30 mN.m-1, indicating that the presence of alkaline lipase did not interfere in the surface activity properties of the tensoactive component. The antimicrobial activity of the AL/BS mix was determined by minimum inhibitory concentration (MIC) micro-assays. Among all the tested organisms, the presence of the mixture only affected the growth of B. subtilis CCT 2576, B. cereus ATCC 10876 and L. innocua. The most sensitive microorganism was B. cereus (MIC 0.013 mg.mL-1). In addition, the effect of the sanitizer against L. innocua attached to stainless steel coupons was determined by plate count after vortexing. The results showed that the presence of the AL/BS mix improved the removal of adhered cells relative to treatment done without the sanitizer, reducing the count of viable cells by 1.72 log CFU.cm-2. However, there was no significant difference between the sanitizers tested and an SDS detergent standard (p<0.05).

Detecção de Listeria spp. e Salmonella spp. em superfícies de melão (Cucumis melo), melancia (Citrullus vulgaris) e mamão (Carica papaya), pelo método imunoenzimático TECRA VIA e procedimentos de cultura / Detection of Listeria spp. and Salmonella spp. in melon (Cucumis melo), watermelon (Citrullus vulgaris) and papaya (Carica papaya), by immunoenzyme TECRA VIA method and procedures for culture

Neste trabalho, foram avaliadas a incidência de Salmonella spp. e Listeria spp. em superfície de frutas, melões (Cucumis melo), melancias (Citrullus vulgaris) e mamões (Carica papaya), coletadas em feira livre e na central de abastecimento (CEASA) em Campinas-São Paulo, Brasil. De um total de 120 frutas 42 amostras foram analisadas simultaneamente pelo método imunoenzimático TECRA-VIA e BAM modificado para presença de Salmonella e por um método canadense Health Protection Branch e TECRA-VIA para detecção de Listeria. As 78 amostras restantes foram analisadas somente pelos métodos de cultura. Salmonella spp. não foi encontrada em nenhuma das 42 amostras analisadas por ambas metodologias sendo que o método TECRA VIA apresentou um falso positivo. Contudo Listeria spp. foi detectada em 1 (2.38 por cento ) das amostras analisadas e apresentou 2 resultados falsos positivos quando utilizado o método TECRA – VIA. Salmonella spp. também não foi constatada nas 78 amostras analisadas apenas pelo método BAM modificado. Contudo, Listeria spp. foi detectada em 9 (7.50 por cento) das amostras analisadas, sendo que L. innocua e L. grayii foram isoladas e L. welshimeri de melão quando utilizado o método canadense Health Protection Branch. As amostras coletadas em feira livre mostraram uma freqüência maior de Listeria quando comparadas com as obtidas no CEASA.

Comparação entre a eficiência de três meios de plaqueamento, para isolamento de Listeria spp., a partir de carne moída / Comparison between efficiency of three plating media for isolation of Listeria spp., from ground beef

Diferentes meios de plaqueamentos seletivos vêm sendo utilizados no isolamento de bactérias do gênero Listeria. A escolha do meio de cultura em uma análise laboratorial é de suma importância, visto que pode interferir nos resultados obtidos, dificultando o diagnóstico final. A metodologia original do USD prevê a utilização do meio agar LPM no isolamento de Listeria spp., porém, na metodologia revisada, em 1986, este agar foi substituído pelo agar MOX, por ser mais seletivo e facilitar o diagnóstico presuntivo. Neste experimento, comparou-se a eficiência de três ágares de plaqueamento, agar LPM, MMA e MOX no isolamento de Listeria spp. a partir de amostras de carne bovina moída através da metodologia revisada do USDA-FSIS com algumas modificações. De acordo com os resultados, o agar MOX demonstrou-se mais eficiente para o isolamento de L. innocua e L. monocytogenes, sendo que o agar LPM não isolou nenhuma cepa de L. innocua e o agar MMA nenhuma de L. monocytogenes.

Incidencia de Listeria spp en hortalizas frescas / Incidence of Listeria spp in fresh vegetables

Listeria monocytogenes es un patógeno que puede transmitirse por el consumo de hortalizas, en Cuba no se conoce su incidencia en estos alimentos. Evaluar la presencia de Listeria spp y el efecto de los procedimientos de limpieza, en hortalizas frescas comercializadas en Ciudad de La Habana. Se estudió Listeria spp en 86 muestras, mediante el método rápido de Oxoid (1999) y los métodos ISO 11290-1/1996 e ISO 11290-2/1998, se realizó enriquecimiento en frío y pruebas bioquímicas complementarias. Se determinaron indicadores de calidad sanitaria, coliformes (NC ISO 4832/2002) y coliformes fecales (NC 38-02-14/1989). Se comprobó la presencia o no de la bacteria después del proceso de limpieza, en muestras positivas a Listeria spp y en muestras inoculadas con Listeria monocytogenes. En frijolitos chinos, lechuga, zanahoria, col y cebollino se detectó Listeria spp por la prueba rápida; sólo en las tres últimas muestras se aisló L innocua, en concentraciones <102/g. Estas muestras presentaron coliformes >103/g y dos de ellas, coliformes fecales >102/g. Después del proceso de limpieza no se detectó la bacteria en cebollino y zanahoria positivos a L innocua, mientras que en lechuga y zanahoria inoculadas con L monocytogenes, sólo se redujo la carga microbiana. Se comprobó que no es suficiente el proceso tradicional de limpieza para eliminar L monocytogenes a menos que se halle en bajas concentraciones. La única especie identificada fue L innocua, que no constituye un riesgo para la salud. Las muestras positivas a Listeria spp no poseen una buena calidad sanitaria.

Listeria monocytogenes is a pathogen that can be vegetable-borne. Its incidence on this type of food is unknown in Cuba. To evaluate the presence of Listeria spp and the effect of cleaning methods in fresh vegetables on sale in the City of Havana. Eighty six samples were analyzed by using Rapid Test Oxoid (1999) and the traditional ISO 11290-1 (1996) and ISO 11290-2 (1998) methods. Also additional biochemical tests and cold enrichment to 4 ºC, were made. Health quality indicators, coliforms (NC ISO 4832/2002) and faecal coliforms (NC 38-02-14/1989) were determined. The presence or absence of bacteria after the cleaning process was determined in samples positive to Listeria spp and in contaminated samples with Listeria monocytogenes. Listeria spp was detected by the rapid test in lettuce, carrot, cabbage and scallion; Listeria innocua was isolated in the last three ones at<102 UFC/g concentrations. These samples showed coliforms at>103/g concentrations and two of them faecal coliforms at>102/g. After the cleaning process, no bacteria was detected in previously L innocua positive carrot and scallion samples whereas in lettuce and carrot samples innoculated with L. monocytogenes and cleaned, the level of this microorganism was just reduced. It was confirmed that the traditional cleaning process to eliminate L monocytogenes is not enough unless this bacterium is present at low concentrations. The only isolated species L innocua was not a health risk. Listeria spp positive samples did not have good sanitary quality.

Bacteriocin production by Lactobacillus plantarum AMA-K isolated from Amasi, a Zimbabwean fermented milk product and study of the adsorption of bacteriocin AMA-K to Listeria sp

Bacteriocin AMA-K produced by Lactobacillus plantarum AMA-K inhibits the growth of Enterococcus spp., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Listeria spp. Growth of strain AMA-K in BHI, M17, soy milk and molasses was similar to growth in MRS. The effect of organic nitrogen sources, carbohydrates, glycerol, K2HPO4 and KH2PO4, MgSO4, MnSO4, tri-ammonium citrate, Tween 80, vitamins and initial pH on bacteriocin AMA-K was determined. The mode of action of bacteriocin AMA-K was studied. The effect of bacteriocin AMA-K to actively growing Listeria innocua LMG13568, L. ivanovii subsp. ivanovii ATCC19119 and L. monocytogenes ScottA was determined. Adsorption of bacteriocin AMA-K to target cells at different temperatures, pH and in presence of Tween 20, Tween 80, ascorbic acid, potassium sorbate, sodium nitrate and sodium chloride were studied. Bacteriocin AMA-K shares high homology to pediocin PA-1.

A bacteriocina AMA-K produzida por Lactobacillus plantarum AMA-K inibe a multiplicação de Enterococcus spp, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Listeria spp. A multiplicação da cepa AMA-K em BHI, leite de soja e melaço foi semelhante à multiplicação em MRS. O efeito de fontes de nitrogênio orgânico, carboidratos, glicerol, K2HPO4 e KH2PO4, MgSO4, MnSO4, citrato de triamônio, Tween 80, vitaminas e pH inicial sobre a bacteriocina AMA-K foi determinada. O modo de ação da bacteriocina AMA-K foi estudado. O efeito da bacteriocina AMA-K sobre Listeria innocua LMG13568, Listeria ivanovii subsp.ivanovii ATCC19119 e Listeria monocytogenes Scott A foi determinado. A adsorção da bacteriocina AMA-K às células-alvo em diferentes temperaturas, pH e na presença de Tween 20, Tween 80, ácido ascórbico, sorbato de potássio, nitrato de sódio a cloreto de sódio foi avaliada. A bacteriocina AMA-K apresenta grande homologia a pediocina PA-1.

Resistência antimicrobiana de bactérias do gênero Listeria spp. isoladas de carne moída bovina / Antibiotic sensitivity of bacterias of the genus Listeria spp. isolated from bovine ground meat samples

Com o aumento do uso de antimicrobianos como promotores de crescimento e até mesmo com fins terapêuticos na criação de animais de produção, existe o interesse global referente ao consumo de baixos níveis de resíduos de antimicrobianos em alimentos e os efeitos destes na saúde humana. A ingestão de alimentos contendo resíduos de fármacos antimicrobianos pode ocasionar resistência bacteriana aos antimicrobianos utilizados rotineiramente na terapêutica humana, dificultando o tratamento de enfermidades infecciosas humanas. Neste experimento foi realizado o teste de sensibilidade aos antimicrobianos em cepas de Listeria spp. isoladas a partir de amostras de carnes bovinas, através da metodologia descrita pelo NCCLS em 2003. De acordo com os resultados, todas as cepas isoladas foram resistentes à maioria dos antimicrobianos testados. As cepas de L. monocytogenes foram resistentes à gentamicina, cefoxitina, ampicilina, clindamicina, oxaciclina e sulfazotrim. As cepas de L. innocua isoladas foram resitentes à gentamicina, cefoxitina, tetraciclina, vancomicina, oxaciclina e clindamicina

With the increasing use of antibiotics as growth promoters and even for therapeutical purposes on breeding of food-producing animals, there is the worldwide interest related to the ingestion of antibiotical residues on food and their effects on human health. The ingestion of food containing antibodies residues can cause bacterial resistence to the antibodies usually used on human therapies, what difficult the treatment of human infectious illnesses. Antibiotic sensitivity test was realized on Listeria spp. Strains, which were isolated from bovine meat samples, according to the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), 2003. According to the finding results, all isolated strains showed resistance to gentamicine, cefoxitine, ampicyline, clindamicine, oxacycline and sulfazotrim. L. innocua isolated strains showed resistance to gentamicine, cefoxitine, tetracycline, vancomicine, oxacycline and clindamicine

Heterogeneidade da virulência de cepas de Listeria monocytogenes, pertencentes a diferentes sorotipos, isoladas de amostras de alimento, do ambiente de processamento e de amostra clínica / Virulence heterogeneity of Listeria monocytogenes strains isolates from, food, food processing line and clinical samples belonging to different serotypes

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular facultativo responsável por listeriose, uma doença de origem alimentar. Dentre os 13 sorotipos de L. monocytogenes existentes, o sorotipo 4b é o mais freqüentemente isolado de humanos, enquanto os sorotipos 1/2a, 1/2b e 1/2c são mais freqüentes em alimentos e amostras ambientais. O estudo da variabilidade de virulência de quatro cepas de L. monocytogenes recentemente isoladas (1/2B - alimento; 1/2C e 4BENV - ambiente de processamento de alimento; 4BCLIN - sangue), além de duas outras cepas de casos de listeriose (P14 e P14A), foi o objetivo deste trabalho. Avaliou-se a capacidade de invasão, proliferação intracelular, citotoxicidade, disseminação intercelular, polimerização de filamentos de actina e transcrição gênica dos genes de virulência actA, plcA e plcB das cepas em modelos celulares eucarióticos MDBK, HeLa e L929. A cepa de origem alimentar 1/2B apresentou características de invasão, taxa de multiplicação (IGC), assim como a disseminação intercelular, semelhantes às cepas clínicas P14 e 4BCLIN em células HeLa. As cepas de origem ambiental (1/2C e 4BENV), apesar da baixa capacidade de invasão em todas linhagens celulares empregadas, apresentaram IGC superior às demais cepas estudadas e disseminação intercelular superior ou similar às cepas clínicas, dependendo da célula eucariótica. As cepas de origem clínica 4BCLIN, P14, P14A tiveram maiores porcentagens de invasão nas linhagens MDBK e L929, porém, em relação à população intracelular (UFC/mL), as cepas 4BCLIN e P14A foram superiores às demais. Estas últimas também foram citotóxicas às células HeLa, induzindo à liberação de LDH e à morte por necrose. Já as cepas de origem alimentar, ambiental e a cepa clínica P14 não foram citotóxicas às células HeLa e MDBK. Em relação à polimerização dos filamentos de actina não houve diferença estatística entre as cepas. Todos os genes de virulência estudados apresentaram maior número de transcritos para as cepas de origem não clínica (1/2B, 1/2C e 4BENV). Sendo assim, todas as cepas de L. monocytogenes estudadas possuem potencial patogênico, por apresentar pelo menos duas características relacionadas à virulência da espécie. Alimentos possivelmente contaminados com estas cepas representam risco à saúde pública

Listeria monocytogenes is a facultative intracellular pathogen responsible for listeriose, a foodborne disease. Amongst the 13 serotypes of L. monocytogenes, the serotype 4b is more frequently isolated from clinical samples while the serotypes 1/2a, 1/2b and 1/2c are associated with food and food processing environment. The study of the virulence variability of four L. monocytogenes strains recently isolated (1/2B - food; 1/2C and 4BENV - food processing environment; 4BCLIN blood), as well as two strains of listeriosis (P14 and P14A) was the aim of this work. Eukaryotic cellular models HeLa, MDBK and L929 were used to evaluate the invasion capacity, intracellular proliferation, cytotoxicity, intercellular dissemination and polymerization of actin tails of L. monocytogenes strains. Gene transcription of the virulence genes actA, plcA and plcB was also conducted. The food isolate 1/2B presented invasion characteristics, multiplication index (IGC), as well as the intercellular dissemination, similar to the clinical strains P14 and 4BCLIN in HeLa cells. Environmental strains (1/2C and 4BENV), although showing a low capacity of invasion in all cellular models, had the highest IGC comparing to the other isolates. They also showed similar to or higher intercellular dissemination than the clinical ones, depending on the cell line used. The clinical strains 4BCLIN, P14, P14A presented greater invasion capacity in MDBK and L929 cells than all other isolates. However, in relation to the intracellular population (CFU/mL) the isolates 4BCLIN and P14A showed superior results. These strains were also cytotoxic to HeLa cells, inducing LDH release and death due to necrosis. The food, environmental and P14 isolates were not cytotoxic to HeLa and MDBK cells. There was no statistical difference in actin tail polymerization between the strains. The non-clinical isolates (1/2B, 1/2C and 4BENV) presented higher number of transcripts for than the clinical ones. In conclusion, all L. monocytogenes strains studied showed pathogenic potential, based on expression of at least two characteristics related to the virulence of the species. The presence of these strains in food represents public health risk

DNA fingerprinting by ERIC-PCR for comparing Listeria spp. strains isolated from different sources in San Luis: Argentina / Caracterización molecular por ERIC-PCR de cepas de Listeria spp. aisladas de diversos orígenes en San Luis: Argentina

In this study, a total of 24 Listeria spp. strains were analyzed. Twenty-two isolates were obtained in San Luis (Argentina) from human, animal, and food samples. Two types of strains, Listeria monocytogenes CLIP 22762 and Listeria innocua CLIP 74915, were included as reference strains. All isolates were biochemically identified and characterized by serotyping, phage typing, and amplification of the flaA gene by polymerase chain reaction (PCR). Repetitive intergenic consensus (ERIC) sequence-based PCR was used to generate DNA fingerprints. On the basis of ERIC-PCR fingerprints, Listeria spp. strains were divided into three major clusters matching origin of isolation. ERIC-PCR fingerprints of human and animal isolates were different from those of food isolates. In addition, groups I and II included ten L. monocytogenes strains, and only one Listeria seeligeri strain. Group III included nine L. innocua strains and four L. monocytogenes strains. Computer evaluation of ERIC-PCR fingerprints allowed discrimination between the tested serotypes 1/2b, 4b, 6a, and 6b within each major cluster. The index of discrimination calculated was 0.94. This study suggests that the ERIC-PCR technique provides an alternative method for the identification of Listeria species and the discrimination of strains within one species.

En este estudio se analizaron 24 cepas de Listeria spp. De ellas, 22 fueron obtenidas en San Luis (Argentina), a partir de muestras humanas, de animales y alimentos. Se incluyeron 2 cepas de referencia Listeria monocytogenes CLIP 22762 y Listeria innocua CLIP 74915. Todos los aislamientos fueron identificados bioquímicamente y caracterizados por serotipificación, fagotipificación y detección del gen flaA por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se generaron perfiles de bandas de ADN mediante la amplificación de secuencias repetitivas de consenso intergénico de enterobacterias (ERIC-PCR). De acuerdo a los resultados obtenidos por ERIC-PCR, las cepas de Listeria spp. fueron divididas en 3 grupos según su origen. Los perfiles de los aislamientos humanos y animales fueron distintos de los correspondientes a alimentos. Por otra parte, dentro de los grupos I y II se incluyeron 10 cepas de L. monocytogenes y solamente una de Listeria seeligeri. Dentro del grupo III no sólo estuvieron incluidas las 9 cepas de L. innocua sino también 4 de L. monocytogenes. La evaluación de los perfiles de bandas obtenidos por ERIC-PCR permitió la discriminación entre los serotipos ensayados 1/2b, 4b, 6a y 6b dentro de cada grupo. El índice de discriminación calculado para ERIC-PCR fue de 0,94. Los resultados sugieren que la técnica de ERIC-PCR provee un método alternativo válido para la identificación de especies de Listeria y, asimismo, permite la diferenciación de cepas dentro de una misma especie.

Espécies e sorovares de Listeria isolados de animais doentes e portadores no Brasil / Species and serovars of Listeria isolated from sick and clinically healthy animals in Brazil

A análise fenotípica de 246 amostras do gênero Listeria isolados de animais portadores e doentes, provenientes de três regiões do país, colecionadas no período de 1971 a 2000, permitiu caracterizar as espécies e sorovares prevalentes. Dentre os animais predominaram os espécimes fecais de bovinos normais (217 amostras, 88,2 por cento), em contraposição aos 29 isolados (11,7 por cento) de Listeria de animais doentes, apresentando comprometimento do sistema nervoso central (15 amostras, 6,0 por cento) e outras localizações sistêmicas (14 amostras, 5,6 por cento). Quanto às espécies e sorovares, predominaram L. innocua 6a e não tipável (140 amsotras, 56,9 por cento) e L.monocytogenes 4a (37 amostras, 15,0) e 4b (22 amostras, 8,9 por cento) principalmente nas fezes de bovinos hígidos e nos animais doentes, L. monocytogenes sorovares 4b (14 amostras, 5,6 por cento) com destaque nos ruminantes e 1a (8 amostras, 3,2 por cento) incidindo nas outras espécies animais (roedores e canídeos) e tendo localizações prevalentes em áreas distintas ao sistema nervoso central.

Species and serovars of the genus Listeria isolated from different sources in Brazil from 1971 to 1997

Using phenotype techniques, characterization was made to species and serovar of 3,112 strains of Listeria, isolated from different sources of infection such as human (247-7.9 percent) and animals (239-7.6 percent), as well as from various routes of infection, including food (2,330-74.8 percent) and environmental constituents (296-9.5 percent), all coming from different regions of the country and collected during the period 1971-1997. The following species were recovered in the cultures analysed: L. monocytogenes (774-24.8 percent), L. innocua (2,269-72.9 percent), L. seeligeri (37-1.1 percent), L. welshimeri (22-0.7 percent), L. grayi (9-0.2 percent), and L. ivanovii (1-0.03 percent). L. monocytogenes was represented by ten serovars, the most prevalent being 4b (352-11.3 percent), 1/2a (162-5.2 percent), and 1/2b (148-4.7 percent). The predominant serovar in L. innocua was 6a (2,093-67.2 percent). Considerations about laboratory methods for diagnosis and epidemiological aspects are presented on the basis of the results obtained.

Avaliaçäo da sensibilidade de microrganismos selecionados a diferentes concentraçöes de nisina em salsichas comum e de frango / Evaluation of sensibility sausages and poultry sausages

Salsichas de frango e comuns foram tratadas por imersäo em soluçöes contendo diferentes concentraçöes de nisina (0, 25, 50 e 100 UI mL-1) e, à seguir, inoculadas por imersäo em suspensäo de células do microrganismo a ser testado (Brochothrix thermosphacta, Weissella viridescens, Leuconostoc mesenteroides e Listeria monocytogenes), embaladas à vácuo e incubadas a 5§C por 12 dias. Determina a menor concentraçäo de nisina capaz de conter eficazmente o desenvolvimento dos microrganismos selecionados nos dois tipos de salsichas. B. thermosphacta e W. viridescens foram os microrganismos que apresentam a maior sensibilidade, sendo a menor concentraçäo de nisina testada (25 UI mL-1) suficiente para inibir totalmente o desenvolvimento deste último. L. mesenteroides e L. monocytogenes foram controlados somente com a maior concentraçäo de nisina testada (100 UI mL-1). Concentraçöes de 100 UI mL-1 de nisina foram suficientes para conter o desenvolvimento de L. mesenteroides mesmo em salsichas cujas contagens atingiram 1 x 10.000.000 UFC g-1 após o período de incubaçäo quando näo tratadas com nisina. Entretanto, a possível presença de patógenos, como a Listeria monocytogenes, nos faz sugerir a utilizaçäo de nisina em concentraçöes pouco superiores a 100 UL mL-1 para que se obtenha uma margem de segurança. Näo foi detectada diferença significativa (P>0,05) na atividade da nisina para os diferentes tipos de salsicha com nenhum dos microrganismos testados.

Listeria spp. en alimentos de origen animal / Listeria spp. in food of animal origin

Se analizaron diferentes alimentos de origen animal para detectar la presencia de Listeria spp. De 208 muestras de leche cruda de tambo, se obtuvieron 5 capas de Listeria innocua, 1 de L. monocytogenes y 1 de L. welshimeri, tipificadas por pruebas bioquímicas y serológicas. El método de enriquecimiento rápido resultó el de elección y tanto el agar Palcam como el agar Oxford permitieron el crecimeitno de las 7 cepas. L. monocytogenes se recuperó de la leche de un animal con mastitis subclínica. Ninguna de las muestras analizadas de leches pasteurizadas o chocolatada ni de quesos contenía listeria, en cambio en las de helados se recuperó una cepa de L. welshimeri. Para los alimentos cárnicos, el empleo de enriquecimiento en 2 etapas facilitó la detección de Listeria spp. Se observó un predominio de L. ivanovii en el 2,5 por ciento de las muestras